TÉCNICAS DE EDICIÓN GENÓMICA EN CÁNCER DE MAMA

OLAPARIB PARA CÁNCER DE MAMA METASTÁSICO EN PACIENTES CON  MUTACIÓN BRCA EN LA LÍNEA GERMINAL

Como bien sabemos, los genes BRCA son “genes supresores de tumores” que sintetizan proteínas encargadas de reparar daños en el genoma, en particular los daños en la doble cadena de ADN. El olaparib –cuyo nombre completo es poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) inhibitor – aprovecha esta debilidad para atacar a las células cancerosas deficientes en BRCA e incapaces de reparar el daño en el ADN causando lo que se denomina “letalidad sintética”. El Tratamiento con Olaparib (Lynparza) proporciona un beneficio significativo en pacientes con cáncer de mama metastásico HER2 negativo.

TERAPIA GÉNICA BASADA EN microARNs PARA CONTROLAR LA METÁSTASIS EN EL CÁNCER DE MAMA

También se destaca, un reciente estudio acerca de una Terapia génica basada en microARNs para controlar la metástasis en el cáncer de mama, el cual se plantea la combinación de quimioterapia y terapia génica basada en microARNs para controlar la metástasis en el cáncer de mama.  Para ello, en primer lugar, llevaron a cabo un rastreo de polimorfismos SNPs que estuvieran localizados en regiones de unión a microARNs en genes relacionados con el cáncer de mama. El equipo encontró que miR-96 y miR-182 regulan al gen PALLD de forma dependiente al genotipo del polimorfismo. En presencia de uno de los alelos, ambos microARNs se unen al ARN mensajero de PALLD, disminuyen su expresión y se reduce la capacidad invasiva y de migración de las células tumorales.

Referencias bibliográficas:

1. Robson M, Im S, Senkus E, Xu B, Domchek S, Masuda N et al. Olaparib for Metastatic Breast Cancer in Patients with a Germline BRCA Mutation. New England Journal of Medicine [Internet]. 2017 [cited 24 December 2017]; 377(6):523-533. Available from: http://www.nejm.org/doi/full/10.1056/NEJMoa1706450

2. Gilam A, Conde J, Weissglas-Volkov D, Oliva N, Friedman E, Artzi N et al. Local microRNA delivery targets Palladin and prevents metastatic breast cancer. Nature Communications [Internet]. 2016 [cited 24 December 2017]; 7:1-14. Available from: https://www.nature.com/articles/ncomms12868.pdf

TERAPIA CELULAR REGENERATIVA MEDIANTE EL SECRETOMA DE LAS CELULAS MADRE MESENQUIALES (MSC)

El Secretoma de las Células Madre Mesenquiales (MSC)

Las moléculas de las MSC participan tanto en la angiogénesis, la invasión celular, y la regeneración tisular, como en el microambiente tumoral y las metástasis, con mecanismos de acción similares.  El tropismo característico de las MSC hacia el tejido enfermo puede ser utilizado para generar estrategias para la focalización tumoral. El secretoma de las MSC de la médula ósea se ha aislado en diversos tejidos, en donde las citocinas realizan diversas acciones al unirse a los receptores específicos de la superficie celular en donde ejercen su efecto. Las proteínas son secretadas por diversas vías y pueden ser identificadas por diferentes métodos; en el cáncer  desempeñan  un papel importante en los procesos de proliferación excesiva, reducción de la apoptosis, invasión inmune, angioneogénesis, alteración en el metabolismo energético y el desarrollo de resistencia a los tratamientos contra el cáncer.

MSC como terapia regenerativa celular por:

• Las MSC tienen potencial regenerativo por acciones paracrinas.
• El secretoma de las MSC puede interactuar con las células precursoras del cáncer.
• La senalización ˜ de las MSC es similar a la que está involucrada en las funciones regenerativas y en las favorecedoras para el desarrollo del cáncer

Referencias bibliográficas:

1. El secretoma de las células madre mesenquimales y la terapia celular regenerativa en cáncer [Internet]. Gaceta Mexicana de Oncología. 2016; 15(6):329---331. Disponible en: http://smeo.org.mx/images/GAMO/2016/GAMO_V15_6_2016.pdf

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA Y ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL EN CÁNCER DE MAMA

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

Algunas enzimas de la familia ribonucleasa (RNasa) han suscitado un especial interés debido a su actividad citotóxica, ya que se podrían usar como agentes terapéuticos para el tratamiento del cáncer.

Como ejemplo de RNasa que tienen efecto citotóxico destaca la Onconasa (ONC), una RNasa procedente de oocitos y embriones tempranos de Rana pipiens que se encuentra en estudios clínicos de fase III como agente antitumoral para el tratamiento de mesotelioma maligno presentando selectividad para células tumorales. Al unirse a la superficie de células tumorales y ser internalizada en el citosol, la ONC causa la muerte celular como resultado de la potente inhibición de la síntesis proteica mediante un mecanismo que implica la degradación del RNA celular. Es conocido que la ONC no es inhibida por el inhibidor proteico de RNasas presente en el citosol de células de mamífero (IR), lo que explica la mayor citotoxicidad de la ONC en comparación con otras RNasas de mamífero y, por consiguiente, su efecto antitumoral.

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL

El anticuerpo monoclonal en cancer de mama: Trastuzumab

La terapia es un anticuerpo monoclonal que se une al receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER-2), el cual es un receptor con actividad de tirosina cinasa que se expresa en altas concentraciones en algunos tipos de cáncer de seno y también en otros tipos de cáncer. El mecanismo de acción del trastuzumab no se comprende en su totalidad, pero una posibilidad probable es que impida que el HER-2 envíe señales que promuevan crecimiento. Es posible que el trastuzumab tenga también otros efectos, como inducir el sistema inmunitario para que combata a las células que expresen altas concentraciones de HER-2

Referencias bibliográficas:

1. Proteínas recombinantes con efecto antitumoral [Internet]. Vilanova.M,  Benito.A, Ribó. Marc. Universidad de Girona. 2012. Disponible en: http://www.oepm.es/pdf/ES/0000/000/02/38/80/ES-2388020_A1.pdf

2.Gil Hernández A, Sánchez de Medina Contreras F. Tratado de nutrición. 3rd ed. Madrid: Médica Panamericana; 2013. Disponible en :http://media.axon.es/pdf/79407.pdf

AMPLIFICACIÓN DEL ONCOGÉN HER2/neu EN CÁNCER DE MAMA POR HIBRIDACIÓN IN SITU FLUORESCENTE (FISH)

La hibridación in situ con fluorescencia (FISH), es una técnica de citogenética molecular en la cual se puede detectar simultáneamente cambios cromosómicos numéricos y estructurales en un locus específico de protooncogenes, localizados en un mismo o diferentes cromosoma.

Utiliza moléculas fluorescentes, llamadas fluorocromos, para poder localizar genes o fragmentos de DNA. La técnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, estas son llamadas sondas, las que son complementarias de las secuencias de DNA a estudiar. Estas sondas son marcadas con fluorocromos y posteriormente se hibridan o unen al DNA complementario, permitiendo así localizar las secuencias en las que se encuentran. 

La amplificación o sobreexpresión de HER2 se considera el resultado de la enfermedad y el marcador predictivo de la respuesta al tratamiento. 

El análisis por FISH se realiza sobre tejido de cáncer de mama extirpado durante la biopsia con el fin de determinar si las células poseen copias adicionales del gen HER2 o no. Cuanto mayor sea la cantidad de copias del gen HER2, mayor será la cantidad de receptores HER2 que poseen las células. Estos receptores de HER2 reciben señales que estimulan la multiplicación de células del cáncer de mama.

Los resultados del análisis por FISH dirán si el cáncer es “positivo” o “negativo”  para HER2.

Las sondas de utilidad diagnóstica son:

• Sondas centroméricas: para la detección de alteraciones numéricas y como control de referencia de la hibridación de sondas de locus específicos.

• Sondas especificas del locus: para la detección de translocaciones, delecciones o amplificaciones, como sondas de fusión o sondas Split.

FISH de HER2 en cáncer de mama. El panel de la izquierda muestra células de un tumor de mama con amplificación del gen HER2 (puntos rojos ).  A la derecha podemos ver células de un tumor  sin amplificación. La paciente de la izquierda se beneficiara, en términos de supervivencia, del tratamiento trastuzumab ( anticuerpo monoclonal dirigido contra HER2).

Hibridación fluorescente in situ: Tras los pasos preparatorios y el pretratamiento, se realiza la desnaturalización y la hibridación el día 1. Se usa el kit de sonda de color dual ZytoLight® SPEC HER2 / CEN17 para la hibridación. Los portaobjetos se hibridaron durante la noche a 37 ° C. El día 2, después de los pasos de lavado, la solución DAPI / Antifade-solution (MT1) se deja caer sobre los portaobjetos. La evaluación de los portaobjetos se lleva a cabo por el microscopio de fluorescencia Olympus BX51. Con el uso de filtros apropiados, las señales del gen HER2 marcado (verde) y de las secuencias del satélite alfa del centrómero del cromosoma 17 (rojo) se cuenta en 100 células para cada muestra.

Referencias bibliográficas:

1. SAGLICAN, Y. & INCE, Ü. HER2/neu status in breast cancer specimens: Comparison of immunohistochemistry (IHC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) methods. Int. J. Morphol., 33(2):737-742, 2015. Disponible en: http://www.scielo.cl/pdf/ijmorphol/v33n2/art51.pdf
2. BreastCancer.org. Análisis de Hibridación fluorescente in situ. 2016. Disponible: http://www.breastcancer.org/es/sintomas/analisis/tipos/fish

PRUEBA DE PCR EN CÁNCER DE MAMA

Técnicas cuantitativas de PCR en tiempo real para la determinación del oncogén HER2/neu

• Tema: Técnicas cuantitativas de PCR en tiempo real para la determinación del oncogén HER2/neu
• Objetivo: Evaluar la amplificación o sobreexpresión del gen HER2/neu en Cáncer de Mama
• Muestra biológica: Tejido mamario
• Tipo de ácido nucleico: ADN genómico humano de células del área de la mama
• Extracción: Tres y  cuatro cortes de 20 micrómetros de grosor del  tejido embebido en parafina
• Almacenamiento: Cortes almacenados en viales de 1,5 ml libres de DNAasas y RNAasa a temperatura entre 20 y 25 °C por 24-48 horas hasta su uso.
• Método de extracción: Método de Qiagen (DNeasy Tissue Kit-for DNA purification)
• Genes amplificados: HER2/neu y Gen de expresión constitutiva de referencia (gastrina)
• Tipo de PCR: PCR en tiempo real
• Confiabilidad: 95%
• Susceptibilidad: 85 %

La PCR se fundamenta en la propiedad natural del  DNA  polimerasa  para  duplicar  el  DNA por elongación de cadenas complementarias, al iniciar la síntesis a partir  o primers, que  indican el  inicio  y  el  final  de  fragmento  a duplicar.  La técnica usa ciclos de alta temperatura (95ºC denaturación) para separar las cadenas de DNA recién formadas; ciclos de baja temperatura (55ºC-alineamiento) para dejar que vuelvan  a  unirse  nuevamente  a  las  polimerasas, y ciclos de temperatura media (72ºC-extensión) para que el DNA polimerasa duplique estas nuevas cadenas usando los deoxidonucleótidos trisfosfato (dNTPs) añadidos a la reacción y necesarios para obtener  una  réplica  exacta  de  la  cadena  original (59,60).

 Referencia bibliográfica: 

1. Evaluation of three molecular methods for tracking and identifying HER2/neu oncogene in breast cancer patients. González L, Aristizábal B. MEDICINA UPB 29(1): 17-40. 2010. Disponible en: https://revistas.upb.edu.co/index.php/Medicina/article/viewFile/650/pdf_22  
2. Estado de HER2/neu. Breast Cancer. 2016. Disponible en: http://www.breastcancer.org/es/sintomas/diagnostico/her2

PRUEBA DE TAMIZAJE Y PRUEBA CONFIRMATORIA PARA CÁNCER DE MAMA

Como sabemos, las medidas más importantes que se pueden tomar para prevenir la muerte por cáncer de mama consisten en encontrar el cáncer temprano y recibir el tratamiento más avanzado para combatir la enfermedad. El cáncer que se detecta temprano, cuando es pequeño y no se ha extendido, es más fácil de tratar con buenos resultados.

PRUEBA DE TAMIZAJE

Mamografía: examen por rayos-X de dosis baja que produce imágenes del seno. Juega un papel central en la detección temprana del cáncer de seno, ya que puede identificar cambios en los senos, antes de que el médico o el paciente los puedan sentir. La mamografía también puede identificar un carcinoma ductal in situ (CDIS).

Procedimiento:
El seno se somete a presión entre dos placas para aplanar y dispersar el tejido.Esta presión ejercida es por sólo unos cuantos segundos.

PRUEBA CONFIRMATORIA

Biopsia de mama: una biopsia por punción con aguja gruesa (CNB),  ancha y hueca para extraer fragmentos de tejido mamario de un área que causa sospecha y que el médico ha palpado o ha sido identificada en un estudio por imágenes. 

Procedimiento:

Se extrae un pequeño cilindro (cuña) de tejido a través de la aguja. Una vez que se extrae el tejido, se retira la sonda o la aguja. No se necesitan puntos de sutura. El área se cubre con un vendaje estéril. Puede que se aplique presión por un corto tiempo para ayudar a limitar el sangrado.

Referencias bibliográficas:

1. Abugattas. J, Manrique. J, Vidaurre.T. Mamografía como instrumento de tamizaje en cáncer de mama. Rev. peru. ginecol. obstet.  [Internet]. 2015  Jul [citado  2017  Nov  18];  61( 3 ): 311-319. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2304-51322015000300018&lng=es.
2. Biopsia del seno [Internet]. American Cancer Society. 2017 [cited 18 November 2017]. Available from: https://www.cancer.org/es/cancer/cancer-de-seno/pruebas-de-deteccion-y-deteccion-temprana-del-cancer-de-seno/biopsia-del-seno.html
3. Exámenes de detección del cáncer de seno (mama) [Internet]. National Cancer Institute. 2017 [cited 18 November 2017]. Available from: https://www.cancer.gov/espanol/tipos/seno/paciente/deteccion-seno-pdq#section/_13

ALTERACIONES EN LA EPIGENOMA DEL CÁNCER DE MAMA

El cáncer es el resultado de la interacción de factores genéticos y ambientales (físicos, químicos y biológicos) que producen la degeneración de las células, dando cabida a lesiones precancerosas y, finalmente, a tumores malignos.

Existe una variedad de otros procesos biológicos que conducen a cambios en el patrón de crecimiento celular conocidos como cambios epigenéticos. Dentro de estos cambios se consideran a los ocasionados por los medios externos así como el estilo de vida, la dieta, el consumo de tabaco, alcohol y otras sustancias de esa índole. También se involucran procesos que conllevan a  la Metilación del ADN, en el cual se destaca el gen ESR1, como uno de los más susceptibles a ser metilados. La alteración de este tipo de cáncer se han clasificados  en dos subgrupos de tumores de mama según su epigenoma.

• Epi-Basal, caracterizado por la pérdida de marcas epigenéticas que causa roturas en los cromosomas
• Epi-Luminal B, que presenta inactivación epigenética de genes importantes que deberían protegernos del cáncer y estas células alteradas ya no pueden hacerlo. Este  se comporta de forma especialmente agresiva, y está asociado a una supervivencia menor de las pacientes. 

Por otro lado, se mostró que el cáncer de mama HER2 +  se puede dividir en cuatro suptipos : Luminal A, Luminal B, HER2 enriquecido y basal-like.

Metilación del ADN

Referencias bibliográficas:

1. Rodríguez D, García S, Jaimes J, Barbosa R, Montesinos A, Beltrán O. Metilación del ADN en cáncer de mama. Rev Hosp Jua Mex [Internet]. 2015 [cited 11 November 2017]; 82(3 y 4):165-168. Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/juarez/ju-2015/ju153-4d.pdf
2. Nueva clasificación del cáncer de mama basada en la epigenética | Health Universitat de Barcelona Campus [Internet]. Hubc.ub.edu. 2014 [cited 11 November 2017]. Available from: http://hubc.ub.edu/es/el-hubc/actualidad/noticias/nueva-clasificacion-del-cancer-de-mama-basada-en-la-epigenetica

ALTERACIONES EN LA TRADUCCIÓN DEL CÁNCER DE MAMA

La Traducción es un proceso que ocurre en el citoplasma celular y tiene como finalidad la formación de proteínas. El TP53 actúa como un gen supresor del cáncer y codifica una proteína que lleva su mismo nombre( p35). Esta gen participa en diversas funciones  fisiológicas de a célula para mantener la integridad y estabilidad genómica. Sin embargo, la alteración de esta proteína p53 produce inestabilidad, siendo las células incapaces de evitar la proliferación o activar la apoptosis  cuando esta comprometida la integridad del ADN, de manera que son pueden acumular las mutaciones produciendo una proteína alterada capaz para la carcinogenésis, en especial del cáncer de mama.

Referencias bibliográficas:

1. Pickup M, Mouw J, Weaver V. The extracellular matrix modulates the hallmarks of cancer. EMBO reports [Internet]. 2014 [cited 4 November 2017];15(12):1243-1253. Available from: http://embor.embopress.org/content/15/12/1243
2. BASES MOLECULARES DEL CÁNCER [Internet]. FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS -PATOLOGÍA-GRUPO 3A. 2014 [cited 28 October 2017]. Available from: https://grupo3amedicina.wordpress.com/2014/08/13/bases-moleculares-del-cancer-3/
3. Rheinbay E, Parasuraman P, Grimsby J, Tiao G, Engreitz J, Kim J et al. Recurrent and functional regulatory mutations in breast cancer. Nature [Internet]. 2017 [cited 4 November 2017];547(7661):55-60. Available from: https://www.nature.com/articles/nature22992

ALTERACIONES EN LA TRANSCRIPCIÓN DEL CÁNCER DE MAMA

El p53 ( Gen TP53) es un factor de transcripción que corresponde a  un gen supresor tumoral localizado en el brazo corto cromosoma 17p13.1. Funciona como un guardián contra la formación del cáncer, ya que  impide la propagación de células genéticamente dañadas.  Ante determinadas situaciones oncogénicas  y genotóxicas la p53, responde produciendo detención del ciclo celular o apoptosis. En las mutaciones del p53, se bloquea  su función y provoca que los portadores desarrollen tumores con facilidad. Seguir leyendo

Referencias bibliográficas:

1. Imigo F, Mansilla E, Delama I, Poblete M, Fonfach C. Clasificación molecular del cáncer de mama. Universidad Austral de Chile [Internet]. 2011 [cited 28 October 2017];(1):67-74. Available from: http://mingaonline.uach.cl/pdf/cuadcir/v25n1/art10.pdf

2. BASES MOLECULARES DEL CÁNCER [Internet]. FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS - PATOLOGÍA - GRUPO 3A. 2014 [cited 28 October 2017]. Available from: https://grupo3amedicina.wordpress.com/2014/08/13/bases-moleculares-del-cancer-3/

ALTERACIONES DE LA REPLICACIÓN EN CÁNCER DE MAMA

El cáncer de mama es una enfermedad resultante de una desregulación genética. El BRCA1 y el BRCA2 son genes humanos que producen proteínas supresoras de tumores. Estas proteínas ayudan a reparar el ADN dañado y, por lo tanto, tienen el papel de asegurar la estabilidad del material genético de las células. La proteína BRCA1 ayuda a prevenir el crecimiento incontrolado de las células reparando el ADN nuclear con proteínas codificadas por los genes RAD51 y BARD1. La proteína BRCA2 también controla el crecimiento celular e interactúa con el RAD51 en reparación del ADN y recombinación homóloga. Cuando uno de estos genes tiene una mutación, o alteración, ya no se produce su proteína o esta no funciona correctamente y el daño al ADN no puede repararse adecuadamente. 

Referencias bibliográficas:

1. Calderón Del Valle SA, Gallón Villegas LJ. Cáncer de mama asociado a mutaciones genéticas de los BRCA 1 y 2. Rev CES Med 2012; 26(2): 185-199. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/cesm/v26n2/v26n2a05.pdf
2. Narod SA, Rodríguez AA. Predisposición genética para el cáncer de mama: genes BRCA1 y BRCA2. Salud Pública Mex 2011; 53:420-429: http://www.scielosp.org/pdf/spm/v53n5/a10v53n5.pdf
3. Briceño-Balcázar I, Gómez-GutiérrezA, Díaz-Dussán NA, Noguera-Santamaría MC, Díaz-Rincón D, Casas-Gómez MC. Mutational spectrum in breast cancer associated BRCA1 and BRCA2 genes in Colombia. Colomb Med (Cali). 2017; 48(2): 58-63. Disponible en: http://www.scielo.org.co/pdf/cm/v48n2/es_1657-9534-cm-48-02-00058.pdf

¿QUÉ ES EL CÁNCER DE MAMA?

El cáncer de mama es un proceso en el que las células sanas de la glándula mamaria degeneran y se transforman en tumorales, proliferando y multiplicándose hasta constituir el tumor. Estos son capaces de destruir tejidos y órganos cercanos ( infiltración) y de trasladarse y proliferar en otras partes del organismo (metástasis). Es una enfermedad multifactorial en la que los factores genéticos y ambientales, así como la edad, las mutaciones y el estado del tejido mamario, entre otros, contribuyen a su aparición y de este modo dicha enfermedad es causa de un rango elevado de defunciones a nivel mundial. Casi exclusivamente se manifiesta en mujeres, sin embargo los hombres también lo pueden padecer.

Referencias bibliográficas:

1. CÁNCER DE MAMA. Asociación Española Contra el Cáncer [Internet]. 2014 [cited 14 October 2017];1(1):4-5. Available from:

https://www.aecc.es/Comunicacion/publicaciones/Documents/Cancer-Mama_2014.pdf

2. Prolla C, Silva P, Netto C, Goldim J, Ashton-Prolla P. Knowledge about breast cancer and hereditary breast cancer among nurses in a public hospital. Revista Latino-Americana de Enfermagem [Internet]. 2015 [cited 14 October 2017];23(1):90-97. Available from:

http://www.scielo.br/pdf/rlae/v23n1/es_0104-1169-rlae-23-01-00090.pdf

MI BIENVENIDA

"El conocimiento no es una vasija que se llena, sino un fuego que se enciende"

                                                                                                               -Plutarco

Bienvenidos compañeros y compañeras a mi blog, un sitio el cual estará adaptado a los conocimientos y evolución  de la ciéncia, en la cual ha intervenido en gran parte la Biología Molecular, la cual mediante su estudio en base a la estructura molecular de los seres vivos nos ha permitido conocer diversos procesos que comprometen a los organismos. El fin de este espacio, es el aprendizaje y adquisición de nuevos conocimientos.