Técnicas cuantitativas de PCR en tiempo real para la determinación del
oncogén HER2/neu
- Tema: Técnicas cuantitativas de PCR en tiempo real para la determinación del oncogén HER2/neu
- Objetivo: Evaluar la amplificación o sobreexpresión del gen HER2/neu en Cáncer de Mama
- Muestra biológica: Tejido mamario
- Tipo de ácido nucleico: ADN genómico humano de células del área de la mama
- Extracción: Tres y cuatro cortes de 20 micrómetros de grosor del tejido embebido en parafina
- Almacenamiento: Cortes almacenados en viales de 1,5 ml libres de DNAasas y RNAasa a temperatura entre 20 y 25 °C por 24-48 horas hasta su uso.
- Método de extracción: Método de Qiagen (DNeasy Tissue Kit-for DNA purification)
- Genes amplificados: HER2/neu y Gen de expresión constitutiva de referencia (gastrina)
- Tipo de PCR: PCR en tiempo real
- Confiabilidad: 95%
- Susceptibilidad: 85 %
La PCR se fundamenta en la
propiedad natural del DNA polimerasa
para duplicar el DNA
por elongación de cadenas complementarias, al iniciar la síntesis a partir o primers, que indican el
inicio y el
final de fragmento
a duplicar. La técnica usa ciclos
de alta temperatura (95ºC denaturación) para separar las cadenas de DNA recién
formadas; ciclos de baja temperatura (55ºC-alineamiento) para dejar que
vuelvan a unirse
nuevamente a las
polimerasas, y ciclos de temperatura media (72ºC-extensión) para que el
DNA polimerasa duplique estas nuevas cadenas usando los deoxidonucleótidos
trisfosfato (dNTPs) añadidos a la reacción y necesarios para obtener una
réplica exacta de la cadena
original (59,60).
Referencia bibliográfica:
- Evaluation of three molecular methods for tracking and identifying HER2/neu oncogene in breast cancer patients. González L, Aristizábal B. MEDICINA UPB 29(1): 17-40. 2010. Disponible en: https://revistas.upb.edu.co/index.php/Medicina/article/viewFile/650/pdf_22
- Estado de HER2/neu. Breast Cancer. 2016. Disponible en: http://www.breastcancer.org/es/sintomas/diagnostico/her2
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