La hibridación in situ con fluorescencia (FISH), es una técnica de citogenética molecular en la cual se puede detectar simultáneamente cambios cromosómicos numéricos y estructurales en un locus específico de protooncogenes, localizados en un mismo o diferentes cromosoma.
Utiliza moléculas fluorescentes,
llamadas fluorocromos, para poder localizar genes o fragmentos de DNA. La
técnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, estas
son llamadas sondas, las que son complementarias de las secuencias de DNA a
estudiar. Estas sondas son marcadas con
fluorocromos y posteriormente se hibridan o unen al DNA complementario,
permitiendo así localizar las secuencias en las que se encuentran.
La amplificación o sobreexpresión de HER2 se considera el resultado de la enfermedad y el marcador predictivo de la respuesta al tratamiento.
El análisis por FISH se realiza
sobre tejido de cáncer de mama extirpado durante la biopsia con el fin de
determinar si las células poseen copias adicionales del gen HER2 o no. Cuanto
mayor sea la cantidad de copias del gen HER2, mayor será la cantidad de
receptores HER2 que poseen las células. Estos receptores de HER2 reciben
señales que estimulan la multiplicación de células del cáncer de mama.
Los resultados del análisis por
FISH dirán si el cáncer es “positivo” o “negativo” para HER2.
Las sondas de utilidad
diagnóstica son:
• Sondas centroméricas: para la
detección de alteraciones numéricas y como control de referencia de la
hibridación de sondas de locus específicos.
• Sondas especificas del locus: para
la detección de translocaciones, delecciones o amplificaciones, como sondas de
fusión o sondas Split.
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| FISH de HER2 en cáncer de mama. El panel de la izquierda muestra células de un tumor de mama con amplificación del gen HER2 (puntos rojos ). A la derecha podemos ver células de un tumor sin amplificación. La paciente de la izquierda se beneficiara, en términos de supervivencia, del tratamiento trastuzumab ( anticuerpo monoclonal dirigido contra HER2). |
Hibridación fluorescente in situ:
Tras los pasos preparatorios y el pretratamiento, se realiza la
desnaturalización y la hibridación el día 1. Se usa el kit de sonda de color
dual ZytoLight® SPEC HER2 / CEN17 para la hibridación. Los portaobjetos se
hibridaron durante la noche a 37 ° C. El día 2, después de los pasos de lavado,
la solución DAPI / Antifade-solution (MT1) se deja caer sobre los portaobjetos.
La evaluación de los portaobjetos se lleva a cabo por el microscopio de
fluorescencia Olympus BX51. Con el uso de filtros apropiados, las señales del
gen HER2 marcado (verde) y de las secuencias del satélite alfa del centrómero
del cromosoma 17 (rojo) se cuenta en 100 células para cada muestra.
Referencias bibliográficas:
- SAGLICAN, Y. & INCE, Ü. HER2/neu status in breast cancer specimens: Comparison of immunohistochemistry (IHC) and fluorescence in situ hybridization (FISH) methods. Int. J. Morphol., 33(2):737-742, 2015. Disponible en: http://www.scielo.cl/pdf/ijmorphol/v33n2/art51.pdf
- BreastCancer.org. Análisis de Hibridación fluorescente in situ. 2016. Disponible: http://www.breastcancer.org/es/sintomas/analisis/tipos/fish
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