PRUEBA DE PCR EN CÁNCER DE MAMA

Técnicas cuantitativas de PCR en tiempo real para la determinación del oncogén HER2/neu

• Tema: Técnicas cuantitativas de PCR en tiempo real para la determinación del oncogén HER2/neu
• Objetivo: Evaluar la amplificación o sobreexpresión del gen HER2/neu en Cáncer de Mama
• Muestra biológica: Tejido mamario
• Tipo de ácido nucleico: ADN genómico humano de células del área de la mama
• Extracción: Tres y  cuatro cortes de 20 micrómetros de grosor del  tejido embebido en parafina
• Almacenamiento: Cortes almacenados en viales de 1,5 ml libres de DNAasas y RNAasa a temperatura entre 20 y 25 °C por 24-48 horas hasta su uso.
• Método de extracción: Método de Qiagen (DNeasy Tissue Kit-for DNA purification)
• Genes amplificados: HER2/neu y Gen de expresión constitutiva de referencia (gastrina)
• Tipo de PCR: PCR en tiempo real
• Confiabilidad: 95%
• Susceptibilidad: 85 %

La PCR se fundamenta en la propiedad natural del  DNA  polimerasa  para  duplicar  el  DNA por elongación de cadenas complementarias, al iniciar la síntesis a partir  o primers, que  indican el  inicio  y  el  final  de  fragmento  a duplicar.  La técnica usa ciclos de alta temperatura (95ºC denaturación) para separar las cadenas de DNA recién formadas; ciclos de baja temperatura (55ºC-alineamiento) para dejar que vuelvan  a  unirse  nuevamente  a  las  polimerasas, y ciclos de temperatura media (72ºC-extensión) para que el DNA polimerasa duplique estas nuevas cadenas usando los deoxidonucleótidos trisfosfato (dNTPs) añadidos a la reacción y necesarios para obtener  una  réplica  exacta  de  la  cadena  original (59,60).

 Referencia bibliográfica: 

1. Evaluation of three molecular methods for tracking and identifying HER2/neu oncogene in breast cancer patients. González L, Aristizábal B. MEDICINA UPB 29(1): 17-40. 2010. Disponible en: https://revistas.upb.edu.co/index.php/Medicina/article/viewFile/650/pdf_22  
2. Estado de HER2/neu. Breast Cancer. 2016. Disponible en: http://www.breastcancer.org/es/sintomas/diagnostico/her2

PRUEBA DE TAMIZAJE Y PRUEBA CONFIRMATORIA PARA CÁNCER DE MAMA

Como sabemos, las medidas más importantes que se pueden tomar para prevenir la muerte por cáncer de mama consisten en encontrar el cáncer temprano y recibir el tratamiento más avanzado para combatir la enfermedad. El cáncer que se detecta temprano, cuando es pequeño y no se ha extendido, es más fácil de tratar con buenos resultados.

PRUEBA DE TAMIZAJE

Mamografía: examen por rayos-X de dosis baja que produce imágenes del seno. Juega un papel central en la detección temprana del cáncer de seno, ya que puede identificar cambios en los senos, antes de que el médico o el paciente los puedan sentir. La mamografía también puede identificar un carcinoma ductal in situ (CDIS).

Procedimiento:
El seno se somete a presión entre dos placas para aplanar y dispersar el tejido.Esta presión ejercida es por sólo unos cuantos segundos.

PRUEBA CONFIRMATORIA

Biopsia de mama: una biopsia por punción con aguja gruesa (CNB),  ancha y hueca para extraer fragmentos de tejido mamario de un área que causa sospecha y que el médico ha palpado o ha sido identificada en un estudio por imágenes. 

Procedimiento:

Se extrae un pequeño cilindro (cuña) de tejido a través de la aguja. Una vez que se extrae el tejido, se retira la sonda o la aguja. No se necesitan puntos de sutura. El área se cubre con un vendaje estéril. Puede que se aplique presión por un corto tiempo para ayudar a limitar el sangrado.

Referencias bibliográficas:

1. Abugattas. J, Manrique. J, Vidaurre.T. Mamografía como instrumento de tamizaje en cáncer de mama. Rev. peru. ginecol. obstet.  [Internet]. 2015  Jul [citado  2017  Nov  18];  61( 3 ): 311-319. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2304-51322015000300018&lng=es.
2. Biopsia del seno [Internet]. American Cancer Society. 2017 [cited 18 November 2017]. Available from: https://www.cancer.org/es/cancer/cancer-de-seno/pruebas-de-deteccion-y-deteccion-temprana-del-cancer-de-seno/biopsia-del-seno.html
3. Exámenes de detección del cáncer de seno (mama) [Internet]. National Cancer Institute. 2017 [cited 18 November 2017]. Available from: https://www.cancer.gov/espanol/tipos/seno/paciente/deteccion-seno-pdq#section/_13

ALTERACIONES EN LA EPIGENOMA DEL CÁNCER DE MAMA

El cáncer es el resultado de la interacción de factores genéticos y ambientales (físicos, químicos y biológicos) que producen la degeneración de las células, dando cabida a lesiones precancerosas y, finalmente, a tumores malignos.

Existe una variedad de otros procesos biológicos que conducen a cambios en el patrón de crecimiento celular conocidos como cambios epigenéticos. Dentro de estos cambios se consideran a los ocasionados por los medios externos así como el estilo de vida, la dieta, el consumo de tabaco, alcohol y otras sustancias de esa índole. También se involucran procesos que conllevan a  la Metilación del ADN, en el cual se destaca el gen ESR1, como uno de los más susceptibles a ser metilados. La alteración de este tipo de cáncer se han clasificados  en dos subgrupos de tumores de mama según su epigenoma.

• Epi-Basal, caracterizado por la pérdida de marcas epigenéticas que causa roturas en los cromosomas
• Epi-Luminal B, que presenta inactivación epigenética de genes importantes que deberían protegernos del cáncer y estas células alteradas ya no pueden hacerlo. Este  se comporta de forma especialmente agresiva, y está asociado a una supervivencia menor de las pacientes. 

Por otro lado, se mostró que el cáncer de mama HER2 +  se puede dividir en cuatro suptipos : Luminal A, Luminal B, HER2 enriquecido y basal-like.

Metilación del ADN

Referencias bibliográficas:

1. Rodríguez D, García S, Jaimes J, Barbosa R, Montesinos A, Beltrán O. Metilación del ADN en cáncer de mama. Rev Hosp Jua Mex [Internet]. 2015 [cited 11 November 2017]; 82(3 y 4):165-168. Available from: http://www.medigraphic.com/pdfs/juarez/ju-2015/ju153-4d.pdf
2. Nueva clasificación del cáncer de mama basada en la epigenética | Health Universitat de Barcelona Campus [Internet]. Hubc.ub.edu. 2014 [cited 11 November 2017]. Available from: http://hubc.ub.edu/es/el-hubc/actualidad/noticias/nueva-clasificacion-del-cancer-de-mama-basada-en-la-epigenetica

ALTERACIONES EN LA TRADUCCIÓN DEL CÁNCER DE MAMA

La Traducción es un proceso que ocurre en el citoplasma celular y tiene como finalidad la formación de proteínas. El TP53 actúa como un gen supresor del cáncer y codifica una proteína que lleva su mismo nombre( p35). Esta gen participa en diversas funciones  fisiológicas de a célula para mantener la integridad y estabilidad genómica. Sin embargo, la alteración de esta proteína p53 produce inestabilidad, siendo las células incapaces de evitar la proliferación o activar la apoptosis  cuando esta comprometida la integridad del ADN, de manera que son pueden acumular las mutaciones produciendo una proteína alterada capaz para la carcinogenésis, en especial del cáncer de mama.

Referencias bibliográficas:

1. Pickup M, Mouw J, Weaver V. The extracellular matrix modulates the hallmarks of cancer. EMBO reports [Internet]. 2014 [cited 4 November 2017];15(12):1243-1253. Available from: http://embor.embopress.org/content/15/12/1243
2. BASES MOLECULARES DEL CÁNCER [Internet]. FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS -PATOLOGÍA-GRUPO 3A. 2014 [cited 28 October 2017]. Available from: https://grupo3amedicina.wordpress.com/2014/08/13/bases-moleculares-del-cancer-3/
3. Rheinbay E, Parasuraman P, Grimsby J, Tiao G, Engreitz J, Kim J et al. Recurrent and functional regulatory mutations in breast cancer. Nature [Internet]. 2017 [cited 4 November 2017];547(7661):55-60. Available from: https://www.nature.com/articles/nature22992